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弘光元年（1645年）四月，左良玉率数十万兵力，由武汉举兵东下，要清君侧，“除马阮”，马士英竟命史可法尽撤江防之兵以防左良玉。史可法只得兼程入援，抵燕子矶，以致淮防空虚。左良玉为黄得功所败，呕血而死，全军投降清朝；史可法奉命北返，此时盱眙降清，泗州城陷。史可法遂至扬州，继续抵抗清军的进攻。
当年五月十日，多铎兵围扬州，史可法传檄诸镇发兵援救，刘泽清北遁淮安，仅刘肇基等少数兵至，防守见绌。此时多尔衮劝降，史可法致《复多尔衮书》拒绝投降。《复多尔衮书》：“今逆贼未服天诛，谍知卷
上西秦，方图报复。此不独本朝不共戴天之恨，抑亦贵国除恶未尽之忧。伏乞坚同仇之谊，全始终之德；合师进讨，问罪秦中；共枭逆贼之头，以泄敷天之愤。则贵国义闻，炤耀千秋，本朝图报，惟力是视。”不卑不亢，流传万世副将史德威史可法追随有年，可法收德威为义子，托以后事；二十四日清军以红衣大炮攻城。入夜扬州城破，史可法自刎，被众将拦住。众人拥下城楼，大呼曰：“我史督师也﹗”，多铎劝降，可法表示：“城亡与亡，我意已决，即碎尸万段，甘之如饴，但扬城百万生灵不可杀戮﹗”，后壮烈就义。因为攻城的清军遭到很大伤亡，心里恼恨，下令屠杀扬州百姓。屠杀延续了十天，死亡逾八十万人，史称“扬州十日”。史可法死后十二日，其遗体不知下落，隔年，史德威将其衣冠葬于扬州城天甯门外梅花岭。后来全祖望曾写《梅花岭记》描述此事。
其实史可法的军事才能并不一定十分出众。后世有专家根据史料复原了当年多铎与史可法对阵南京的兵力分布图，发现史可法的兵力安排并不科学。当然这仅是一家之说。
史可法的才能在南明朝廷里并不是非常突出，但历史将他推到了风口浪尖上。史之才，相对于堵胤锡、张煌言都逊色不少，并且他的政治敏感性和军事敏感性都十分欠缺（比如“联虏平寇”）。但是不可否认的是史可法的忠诚与爱国，这一点甚至得到了敌人的认可。后清朝乾隆皇帝以其忠义，追谥忠正。史可法是左光斗的学生，方苞曾写《左忠毅公轶事》，述说史可法与其师左光斗之间的提携情感，自是铮铮铁骨、有血有泪。
